اصلاح نژاد دام علم و هنر تثبت ژنهای موثر در تولید اقتصادی دام می

اختصاصی از ژیکو اصلاح نژاد دام علم و هنر تثبت ژنهای موثر در تولید اقتصادی دام می دانلود با لینک مستقیم و پر سرعت .

لینک دانلود و خرید پایین توضیحات

فرمت فایل word  و قابل ویرایش و پرینت

تعداد صفحات: 9

اصلاح نژاد دام علم و هنر تثبت ژنهای موثر در تولید اقتصادی دام می‌باشد. اصلاح نژاد با انتخاب دامها و طیور برتر از لحاظ فنوتیپ و با کمک روشهای آمیزشی مناسب، دام و طیور برتر راایجاد می‌کند. اصلاح نژاد یک علم کاربردی بوده و در بخش‌های تخصصی با کاربرد دانش ژنتیک، دانش آمار و رایانه افق جدیدی پیدا کرده است.

چکیده:

مدلهای استفاده شده در ژنتیک کمی عمدتا اثر تجمعی ژنهایی را که عهده دار ایجاد تنوع در صفات می باشند مورد توجه قرار می دهند و فرض اصلی در این مبحث، تفکیک همزمان بسیاری از ژنهای کوچک اثر می باشد. این موضوع مورد تردید است که همه ژنهای مؤثر بر صفات کمی اثرات جزئی داشته باشند و ممکن است برخی از این ژنها سهم عمده ای در تنوع صفات به خود اختصاص داده باشند. متخصصین ژنتیک مولکولی قادر به تعیین ژنوتیپ آنها با استفاده از تکنیک های مولکولی بوده و قادرند بطور مستقیم نشان دهند که چگونه تنوع فنوتیپی از تنوع ژنتیکی موجود در ژنوم موجود ناشی می شود امروزه تکنیک های مولکولی و ژنتیک کمی بصورت مکمل یکدیگر استفاده می گردند. دو دیدگاه عمده برای تعیین ژنوتیپ در ژنتیک وجود دارد که عبارتند از: 1- استفاده از نشانگرهای غیر مستقیم، که در این روش تعیین ژنوتیپ با استفاده از نشانگرهایی که بر روی قطعه کروموزومی خاصی است صورت میگیرد. 2- دیدگاه ژنهای کاندیدا است که در این روش با توجه به اطلاعات موجود، خود ژن کنترل کننده صفت که پروتئین خاصی را کد می کند مورد بررسی قرار می گیرد که در واقع این ژنها به عنوان مارکرهای مستقیم صفات بیولوژیکی و فیزیولوژیکی بکار گرفته می شوند. این مقاله سعی دارد در یک نگرش اجمالی برخی از ژنهای کاندیدا برای کنترل صفات مهم اقتصادی یا ژنهای مرتبط با بروز ناهنجاری های ژنتیکی را معرفی کند.

1- ژن کاپا کازئین (K-Casein Gene):

ژنهای بخش کازئین شیر به چهار گروه عمده K-Casein (با وزن مولکولی 19800 دالتون و 169 اسید آمینه)، Beta-Casein (با وزن مولکولی 24000 دالتون و 209 اسید آمینه)، as1-Casein (با وزن مولکولی 23000 دالتون و 199 اسید آمینه) و as2-Casein (با وزن مولکولی 25000 دالتون و 207 اسید آمینه) تقسیم می شوند که در گاو، بر روی کروموزوم شمار 6 و در گوسفند و بز بر روی کروموزوم شماره 4 قرار گرفته اند. کاپا کازئین یکی از مهمترین پروتئینهای شیر است و توسط ژنی با پنج اگزون و چهار اینترون کنترل می گردد. مقدار پنیر تولیدی و همچنین مانده گاری شیر در خارج از یخچال بطور مستقیم به خصوصیات کاپا کازئین شیر بستگی دارد. الل B ژن کاپاکازئین که حاصل بروز جهش نقطه ای (T/C) در موقعیت اگزون 4 می باشد موجب بالا رفتن راندمان تولید شیر به پنیر می شود در کاتالوگهای اسپرم ژنوتیپهای BB یا AB بیانگر ژنوتیپ های مطلوب برای تولید شیر مورد استفاده در کارخانجات پنیرسازی می باشد. که موجب کاهش زمان انعقاد شیر و بالارفتن ثبات و استحکام دلمه شدن آن می شود.

2- ژن بتالاکتوگلوبولین (Beta-lactoglobulin):

بتالاکتوگلوبولین پروتئین اصلی بخش آب پنیر شیر نشخوارکنندگان است که دارای وزن مولکولی 18200 دالتون است که در گاو و بز بر روی کروموزوم شماره 11 و در گوسفند بر روی کروموزوم شماره 3 تعیین نقشه شده است. ژن بتالاکتوگلوبولین در گوسفند دارای 9737 جفت باز است و شامل 7 اگزون و 6 اینترون می باشد که اگزون 7 این ژن کاملا غیر فعال است و 6 اگزون اولیه مسئول تولید پروتئین بتالاکتوگلوبولین می باشند. ارتباط چندشکلی های موجود در این ژن با صفات تولیدی به خوبی مورد بررسی قرار گرفته است. ژن آلفا لاکتالبومین یکی دیگر از ژنهای بخش آب پنیر است که در گاو در کروموزوم 5 و در گوسفند در کروموزوم 3 شناسائی شده است و دارای 1400 دالتون وزن مولکولی است.

3- ژن فسفوانول کربوکسی کیناز (PEPCK):

این ژن آنزیمی را تولید می کند که این آنزیم، آنزیم کلیدی مسیر گلوکونئوژنز می باشد یعنی مسیری که از طریق آن از سوبستراهای متنوع غیر کربوهیدراته، گلوکز خالص بدست می آید. این آنزیم با سوبسترا قرار دادن فسفوانول و دکربوکسیلاسیون آن باعث تشکیل اگزالواستات پیروات می شود. بطور کلی دو نوع آنزیم فسفوانول کربوکسی کیناز وجود دارد که به دو دسته میتوکندریایی (PEPCK-M) و سیتوزولی (PEPCK-C) تقسیم می شود ژن کد کننده این آنزیم بعنوان یک ژن کاندیدا برای شناسائی تنوع اللی و ارتباط آن با صفات اقتصادی مرتبط با پرورش طیور شناخته شده است و عمدتا ناحیه پروموتور این ژن جهت تعیین ژنوتیپ بکار می رود. از طرفی ژن PEPCK-M ممکن است ژن پروموتور برای حساسیت یا مقاومت به بیماری مارک (Marek disease) باشد.

4- مجموعه ژنی کالپاین، کالپاستاتین (Calpain/Calpastatin):

تا کنون سه آنزیم از خانواده کالپاینها شناسائی شده که عبارتند از W-Calpain، M-Calpain و Calpastatin. که این آنزیمها نقش مهمی در رشد ماهیچه های اسکلتی و میزان تردی گوشت بعد از ذبح دارند که کالپاستاتین آنزیمی با عملکرد متفاوت در این سیستم می باشد. اکنون بخوبی روشن شده که تجزیه پروتئینهای میوفیبریل ماهیچه که توسط آنزیمهای کالپاین صورت می گیرد عمده ترین عامل تردی گوشت در هنگام جمود نعشی می باشد علاوه بر این به نظر میرسد که کالپاستاتین یک ممانعت کننده ویژه آندوژنوسی وابسته به کلسیم می باشد که از عمل آنزیمهای کالپاین جلوگیری میکند و از این طریق میزان تردی گوشت بعد از کشتار را عهده دار می باشد.

5- مجموعه ژنی هورمون رشد، گیرنده هورمون رشد (GH/GHR):

ژن هورمون رشد دارای 5 اگزون و 4 اینترون می باشد که کد کننده پروتئینی با 191-190 اسید آمینه می باشد که از غده هیپوفیز قدامی ترشح می شود این هورمون نقش کلیدی در فرایندهای متابولیکی مانند رشد، تولید مثل، پیری، پاسخهای ایمنی، بلوغ، اشتها، چربی لاشه و اسپرماتوژنز دارد بررسی جهشهای موجود در نواحی مختلف این ژن همواره مورد توجه بسیاری از متخصصان اصلاح نژاد می باشد. ارتباط چندشکلیهای این ژن با خصوصیات

تحقیق در مورد بررسی ایمنی زایی ژنهای L7L12 و P39 در موشهای Balac 65ص Copy

اختصاصی از ژیکو تحقیق در مورد بررسی ایمنی زایی ژنهای L7L12 و P39 در موشهای Balac 65ص Copy دانلود با لینک مستقیم و پر سرعت .

لینک دانلود و خرید پایین توضیحات

فرمت فایل word  و قابل ویرایش و پرینت

تعداد صفحات: 59

فصل دوم

هدف از این تحقیق بررسی ایمنی زایی ژنهای L7/L12 و P39 در موشهای Balac است. بنابراین پس از جداسازی و تکثیر ژنهای فوق مراحل زیر در این تحقیق انجام گرفت.

1- لکون نمودن ژنهای فوق در یک ناقل انتقال دهنده Cleaning vector

2- تعیین ترادف نوکلئوتیدی ژنهای جداشده و مقایسه آن با ژنهای L7/L12

3- کلون نمودن ژنها در پلاسمید بیان کننده پروکاریونی Procaryotic expression vector

4- تولید و تخلیص پروتئینهای L7/L12 و P39

5- کلون نمودن آنها در پلاسمید بیان کننده اوکاریوتی Eucaryotic expression vector

6- هاری کردن پلاسمیدهای فوق از آندوتوکسین

7- تزریق پلاسمیدها، بسویه واکنش و سویه بیماریزا بروسلاآبورتوس به موش Balb/C

8- سنجشهای ایمونولوژیک

باکتریها و پلاسمیدهایی که برای انجام این پایان نامه استفاده دشه اند بترتیب زیر می باشند:

باکتریها: بروسلاآبورتوس سویه های 19S و 544 اشدیشیالکی سویه

اشریشیالکی سویه BL21 – اشریشیاکی سویه BL21(DE3(Plyss

پلاسمیرها: PGEX4T1 – PRT 28a – SK+(pSK) - Pblue Script-PCDNA3

جداسازی کروموزوم بروسلا آبورتوس 19S:

برای تکثیر ج داسازی ژنهای L7/L12 و P39 ابتدا کروموزوم باکتری جداسازی گردید.

مواد:

بافر TE:

Tris – Hel 10mm

EDTA 1.0mm

‍PH بافر را پس از تهیه برروی 8 تنظیم می نمائیم.

پروتئیناز K:

CTAB/NaCl:

Nacl 4.1gr

CTAB 10gr

DDW 100ml (Final Volume)

روش:

ابتدا محیط برنسط برات را تهیه و استریل نموده و ml5 از محیط را با بروسط آبورتوس سویه 19S تلقیح می نمائیم. پس 48 تا 72 ساعت باکتریها رشد کرده و کدورت مناسبی را پیدا می کند. بقیه مراحل تخلیص کروموزوم بشرح زیر است:

1- 5/1 میلی لیتر از سوسپاستیون فوق را مدت 2 دقیقه در rpm5000 سانتریفوژ می نمائیم. محلول رویی را دور می ریزیم.

2- Ml576 از بافر TE را بر روی رسوب باکتری اضافه کرده و رسوب را در بافر حل می نمائیم. سپس ml30 از SDS(10%) و ml3 از پروئیناز K (mg/ml20) را افزوده و بمدت یکساعت در دمای 0C37 نگهداری می نمائیم.

3- پس از مخلوز Ml100 از (M5)NaCl از محلول CTAB/NaCl بمیزان Ml80 اضافه کرده و بمدت 10 دققیق در 0C65 انکوبه می کنیم.

4- هم حجم مخلوط بالا از ترکیب کلروفرم – ایزوآمیل (1/24) به مخلوط افزوده و سپس از مخلوط بمدت 5 دقیقه در rpm10000 سانترفوژ می کنیم. محلول رویی را به لوله دیگر منتقل می نمائیم.

5- هم حجم محلول روئی ترمیب فنل – کلروفرم – ایزوآمیل (1/24/25) پس از مخلوط بمدت 5 دقیقه در vpr10000 سانتریفوژ کرده و محلول رویی به لوله دیگری منتقل می نمائیم.

6- هم حجم محلول روئی ایزوپروپانل اضافه نموده و مخلوط می کنیم. پس از چند دقیقه DNA کروموزومی ته نشین شده که می توان بات یک پیپت پاستور آنرا جمع آوری نمائیم.

7- رسوب DNA کروموزومی را با الکل 70% شستشو داده و پس از خشک شدن در مجاورت هوا در Ml100 از بافر TE حل می نمائیم.

بررسی کمی و کیفی DNA کروموزومی:

برای تعیین خلوط کروموزوم باکتری از مواد و وسایل زیر استفاده میشود.

دانلود مقاله مطالعه وسترن بلاتینگ آنتی ژنهای پروتئینی سوماتیک فوزاریوم سولانی

اختصاصی از ژیکو دانلود مقاله مطالعه وسترن بلاتینگ آنتی ژنهای پروتئینی سوماتیک فوزاریوم سولانی دانلود با لینک مستقیم و پر سرعت .

دانلود مقاله مطالعه وسترن بلاتینگ آنتی ژنهای پروتئینی سوماتیک فوزاریوم سولانی

نوع فایل : Word

تعداد صفحات : 9

فهرست و پیشگفتار

چکیده
مقدمه: الگوی وسترن بلاتینگ آنتی ژنهای پروتئینی عصاره های سوماتیک قارچها در تشخیص گونه و سویه های آنها مفید بوده و می تواند کمک با ارزشی در تشخیص عامل عفونت باشد.
این مطالعه به منظور تعیین الگوی آنتی ژنهای پروتئینی عصاره سوماتیک فوزاریوم سولانی انجام شد.
مواد و روش ها : در این مطالعه سویه 7419 UAMH و 3317 UAMH فوزاریوم سولانی که اولی از بیمار و دومی از هوا جدا شده بود جهت بررسی الگوی آنتی ژنیکی سوماتیک میسلیومهای جوان استفاده گردید، روش الکتروفورز روی ژل پلی اکریل آمید در حضور SDS (SDS-PAGE) و وسترن بلاتینگ برای تعیین تعداد و مشخصات آنتی ژنهای پروتئینی موجود در عصاره ها بکار گرفته شد.
یافته های پژوهش : در آنالیز وسترن بلاتینگ عصاره سوماتیک سویه 7419UAMH فوزاریوم سولانی 16 باند آنتی ژنیک و سویه 3317UAMH فوزاریوم سولانی 11 باند آنتی ژنیک با وزن ملکولی 14 تا 100 کیلو دالتون شناسایی گردید.
بحث و نتیجه گیری: سویه 7419 UAMH فوزاریوم سولانی که از بیمار جدا شده بود در مقایسه با سویه محیطی 3317 UAMH فوزاریوم سولانی باندهای آنتی ژنیک بیشتری ظاهر ساخت.
واژه های کلیدی : فوزاریوم سولانی ، وسترن بلاتینگ، آنتی ژن

مقدمه
فوزاریوم یکی از شایعترین قــارچهایی است که می تواند سبب واکنش های آلرژیک تنفسی در انسان شود(1). این قارچ در شرایط مستعد چون نوتروپنی و ایدز، پیوند مغز استخوان، سرطان، سوختگی، تروما، دیابت می تواند بیماریهایی نظیر آندوکاردیت، آندوفتالمیت، عفونت منتشره، پریتونیت و کراتیت ایجاد نماید، فوزاریوزیس یک بیماری قارچی مهم است که نسبت به درمان مقاوم بوده و اغلب تو سط فوزاریوم سولانی ایجاد می شود(2). راه ورود گونه های فوزاریوم دستگاه تنفس و پوست می باشد. جایگاه اصلی عفونت به ترتیب پوست و خون و ریه است. قارچ پس از ورود و استقرار از طریق خون در بدن منتشر شده اعضایی چون ریه، قلب، کبد، طحال و کلیه را درگیر می کند(3). فوزاریوم زندگی بیماران لوسمیک و یا دچار آنمی آپلاستیک را تهدید می کند(4). ورما آلرژنهای فوزاریوم سولانی سویه 3596 متعلق به انسیتوی تحقیقات کشاورزی دهلی هندوستان(1). وانی تاناکوم آنتی ژنهای پروتئینی پنی سیلیوم مارنفئی را در خلال رشد و کپکی با روش ژل الکتروفورز و وسترن بلاتینگ مشخص نمود(5). هدایتی و همکاران با روش ایمو نو بلاتینگ ثابت نمودند ژنهای 25 و 52 کیلو دالتونی کاندیداآلبیکنس با آنتی بادی IgG سرم های بدست آمده از بیماران مبتلا به واژینیت مزمن کاندیدایی در 100 درصد موارد واکنش مثبت نشان می دهد(6). لذا این مطالعه به منظور شناسایی آنتی ژنهای سوماتیک سویه بالینی 7419 UAMH و سویه محیطی 3317 UAMH فوزاریوم سولانی با استفاده از روش الکتروفورز روی ژل پلی اکریل آمیـــد در حضـــور SDS (SDS-PAGE) و وسترن بلاتینگ انجام شد تا بتوان در آینده نقش آنتی ژنیکی پروتئینهای جدا شده را مورد مطالعه بیشتری قرار داد.
مواد و روش ها
یافته های پژوهش
شکل 1 . الگوی الکتروفورتیکی عصاره های پروتئین های سوماتیک فوزاریوم سولانی ، نمونه های ( A ) سویه UAMH 7419 با غلظت های مختلف . نمونه های ( B ) سویه UAMH 3317 با غلظت های مختلف.همراه با مارکر ملکولی ( M ) بر روی ژل 10 درصد به روشSDS-PAGE .

شکل2. پروتئینهای آنتی ژنیک قابل مشاهده با سرم خرگوش در روش ایمنوبلاتینگ با رنگ آمیزی دی آمینو بنزیدین . شماره 5و6 سویه 7419UAMH. شماره 4 و7سویه 3317 UAMH
بحث و نتیجه گیری
References

Abstract

Introduction: Western blotting pattern of somatic protein antigens extracted from fungi can be useful in identification of different species and strains, and also helps to find the infectious agent. This study was undertaken to determine the somatic protein antigens pattern extracted from Fusarium Solani.

Materials& Methods:

Findings :

Conclusion :

Key words: Fusarium Solani, western blotting, antigen